猪囊尾蚴病诊断技术
1范围
本标准规定了猪囊尾蚴病的病原分离与鉴定和酶联免疫吸附实验(ELISA)两种诊断技术
本标准适用于猪囊尾蚴病的诊断和流行病学调查以及检疫。
2病原分离与鉴定
2.1病原分离
2.1.1样品采集
采集猪的咬肌、舌肌、内腰肌、膈肌、肋间肌、肩胛肌等，亦可采集脑、心脏、肝脏、肺脏
2.1.2样品分离
成熟的猪囊尾蚴为长椭圆形[(6毫米～10毫米)*5毫米]，半透明的囊壁内充满液体，上有一个黍粒大小的白色小结节即为头节(SCOLEX)和颈节(NECK)。脑内寄生的则为圆球形8毫米～10毫米。
将上述任何部位的囊尾蚴，以手术刀和镊子剖离后，以生理盐水洗净，并用滤纸吸干。
2.2病原鉴定
2.2.1分离样品的鸦片制备
以剪刀剪开囊壁，取出完整的头节，再以滤纸吸干囊液后，将其置于两张载玻片之间并压片，于两张载玻片间加入1～2滴生理盐水后置于显微镜下镜检。
2.2.2镜检
以低倍(物镜8倍、目镜5倍)观察囊尾蚴头节的完整性。
2.2.3结果判定
低倍镜检，可见到头节的顶部有顶突，顶突上有内外两圈排列整齐的小钩，顶突的稍下方有四个均等的圆盘状吸盘，即判为猪囊尾蚴。
3酶联免疫吸附试验(ELISA)
3.1材料准备
3.1.1器材
ELISA反应板、酶联免疫检测仪、加样板、洗瓶、10厘米*1厘米普通滤纸条等。
3.1.2试剂
猪囊尾蚴层析抗原、葡萄球菌A蛋白(SPA)辣根过氧化物酶(HRP)标记物(HRP―SPA)、猪囊尾蚴标准阴性和阳性全血滤纸片等。
3.1.3被检猪全血血片
将10厘米*1厘米普通滤纸条的一段标记被检猪号码，另一端吸取被检猪任何部位血液1―2滴，于室内阴干后，置于4度冰箱内(可保存6个月)。
3.1.4溶液配制
溶液配置的方法见附录A(标准的附录)。
3.2操作方法
3.2.1.1首先以抗原包被液(见附录A中A1)洗涤ELISA反应板各三次。
3.2.1.2以抗原包被液将抗原使用说明书稀释至工作浓度。
3.2.1.3用加样器加工作浓度抗原至ELISA反应板各孔内，每孔0.1毫升，加盖后置于室温(11～29)过夜。
注：包被过夜的WLISA反应板加盖后置于冰箱冷冻室内(可保存6各月)，或将包被过夜的ELISA反应板按3.2.2方法洗涤后，晾干，装入塑料袋内密封，置于4冰箱内。(可保存4个月)。
3.2.2洗涤
用力甩净包被过夜的ELISA反应板孔内的抗原包被液，每孔加入洗涤液(见附录A中A2)，浸泡3分钟后，用力甩去洗涤液，并用滤纸吸去残留的洗涤液和驱除孔内气泡，重新加入洗涤液，按同样方法共洗涤三次，即3*3分钟冲洗.。
3.2.3血片的处理
将被检血片、标准阴性血片及标准阳性血片均剪成1厘米*1厘米大小，分别置于青霉素瓶内，每1厘米*1厘米血片加入稀释液(见附录A中A2)0.3毫升，浸泡20分钟，即血片变白后即可。
3.2.4加样
3.2.4.1每份被检血片浸液加两孔，每孔0.1毫升。
3.2.4.2标准阴性、标准阳性对照孔内相应血片浸液两孔，每孔0.1毫升。
3.2.4.3空白对照孔加稀释液两孔，每孔0.1毫升。
3.2.4.4加样后加盖，于室温(11～29)放置30分钟。
3.2.5洗涤方法同3.2.2。
3.2.6加酶标记SPA。
3.2.6.1HRP―SPA标准物按使用说明书以稀释液稀释至工作浓度。
3.2.6.2被检孔、标准阴性孔每孔加HRP―SPA标记物0.1毫升。
3.2.6.3空白对照孔亦加0.1毫升。
3.2.6.4加完后加盖，于室温(11～29)放置30分钟。
3.2.7洗涤方法同3.2.2
3.2.8加底物
每孔加现配置的底物溶液(见附录A中A3)0.1毫升，于室温(11～29)放置10个月。
3.3判定
在对照孔成立的前提下，即在标准阳性孔呈深黄色，标准阴性孔呈无色或浅黄色，空白孔呈无色，判定检验结果。
3.3.1目测判定
与标准阴性孔相比，颜色深于标准阴性孔者，即判定为ELISA法阳性病猪(+)。
3.3.2酶联免疫检测仪判定(490纳米)
以空白对照孔调零，测定被检孔透光(OD)值。当OD<0.22，判定为ELISA法阴性(―)；当OD>0.26判定为ELISA法阳性(+)；当0.23
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